1 吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析硅膠裝人搪瓷盤置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿整個(gè)柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚比例泵人溶劑,至溶劑流出止。有機(jī)玻璃管
2 上樣
將物質(zhì)用適量丙酮溶解,泵人層析柱柱頭,然后泵人石油醚。
3 洗脫
以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液,60ML/MIN的流速進(jìn)行梯度洗脫,柱的使用壓力為2~3KG/C 。至洗脫*,相同流份合并,回收溶劑。將物質(zhì)合并蒸干。加人適量甲醇熱溶后自然放置,析出結(jié)晶。
4 層析柱再生、平衡 有機(jī)玻璃管
有效成分經(jīng)TLC檢識(shí)全部流出后,用純丙酮5000ML再生,丙酮一石油醚(5:95)平衡后,可再次上樣,反復(fù)使用。
5 重結(jié)晶
結(jié)晶析出*后,減壓過濾,然后用少量甲醇洗滌。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置,結(jié)晶再次析出,待結(jié)晶*后,抽濾,用少量乙醚洗滌,將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中,35度真空干燥至恒重。密封于瓶中,置干燥器中保存。有機(jī)玻璃管
6 薄層層析柱分析
于105度烘至斑點(diǎn)清晰。表明在該展開系統(tǒng)下,樣品和對(duì)照品都具有相同的RF值,并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn),沒有雜質(zhì)斑痕。